本办法以L-赖氨酸和L-蛋氨酸为例，对饲料等样品中十几种氨基酸的测定办法做一扼要介绍。

一、办法原理

对氨基酸举行柱前衍生后，在254nm波长下，以保存工夫定性，接纳外标法剖析时，需做尺度曲线，无需参加正亮氨酸内标物。

二、所需仪器和试剂

仪器：

a.高效液相色谱仪含紫外检测器

（上海仪电剖析仪器有限公司LC220）；

b. 蒸发回流安装；

c.万分之一天平；

d.恒温水浴锅；

e.实行室常用玻璃仪器。

试剂：

a.L-赖氨酸和L-蛋氨酸尺度品；

b.甲醇（色谱纯）；

c.乙腈（色谱纯）；

d.醋酸钠（剖析纯）；

e.乙酸（剖析纯）；

f.正己烷（色谱纯）；

g.盐酸（剖析纯）；

h.苯酚（剖析纯）。

三、实行办法

1.色谱条件

2.试剂配制

2.1 样品前处置溶液的配制

6mol/L的盐酸溶液：将盐酸溶液（36%-38%）与超纯水等体积混淆，混匀；

0.1mol/L的盐酸溶液：取8.3mL盐酸溶液（36%-38%），用水定容到1000mL的容量瓶中，混匀；

0.1%苯酚的6mol/L的盐酸溶液：移取20μL苯酚，参加20mL6mol/L盐酸溶液中，混匀。

2.2 混淆尺度品溶液的配制

正确称量赖氨酸、蛋氨酸尺度尺度品配制成2.5μmol/mL的赖氨酸、蛋氨酸尺度溶液，用0.1mol/L的盐酸溶液浓缩成2.5、1.25、0.5、0.25、0.125μmol/mL系列浓度绘制尺度曲线，4℃冷藏保管。

2.3 衍生试剂的配制

三乙胺溶液：正确汲取1.4mL三乙胺至10mL容量瓶中，用乙腈定容，摇匀，即得；

异硫氰酸苯酯溶液：正确移取250μL异硫氰酸苯酯至10mL容量瓶中，用乙腈定容，摇匀，即得。

3.样品处置

3.1 前处置

正确称取0.1000g样品于50mL圆底烧瓶中，参加10mL0.1%苯酚溶液消融，110℃条件下加热回流24h，反响完成后，冷却，转移到100mL容量瓶中，定容。量取50mL溶液蒸干，用水定容至2mL，待衍生。

3.2 衍生反响

正确量打水解后溶液及氨基酸尺度品0.2mL，辨别置于1.5mL离心管中（内标法需往每支离心管中正确参加正亮氨酸内标50μL），然后辨别参加三乙胺乙腈溶液0.1mL和异硫氰酸苯酯乙腈溶液0.1mL，摇匀室温静置衍生1小时。衍生完毕后辨别参加0.4mL正己烷，密封后猛烈振荡5~10s，静置分层，取0.2mL上层溶液和0.8mL水混淆，过0.45μm无机系针式过滤器，待上机剖析。

四、实行后果

1.标样谱图

2.样品谱图

3.尺度曲线

蛋氨酸尺度曲线

y=289746.8125x-8752.5，R=0.9996

赖氨酸尺度曲线

y=478883.6875x-426.25，R=0.9998

4.后果盘算

备注：